ننڍڙن آبي ٽيڊپولز لاءِ تجارتي سائپرميٿرين جي تيارين جي موت ۽ زهريت

هن مطالعي ۾ تجارتي جي موتماري، غير جانداريت، ۽ زهريت جو جائزو ورتو ويوسائپرميٿرينانوران ٽيڊپولز لاءِ فارموليشن. ايڪيوٽ ٽيسٽ ۾، 100-800 μg/L جي ڪنسنٽريشن کي 96 ڪلاڪن لاءِ آزمايو ويو. ڪرونڪ ٽيسٽ ۾، قدرتي طور تي ٿيندڙ سائپرميٿرين ڪنسنٽريشن (1، 3، 6، ۽ 20 μg/L) کي موت جي شرح لاءِ آزمايو ويو، ان کان پوءِ مائڪرو نيوڪليس ٽيسٽنگ ۽ 7 ڏينهن لاءِ ڳاڙهي رت جي سيل نيوڪليئر غير معموليات. ٽيڊپولز لاءِ ڪمرشل سائپرميٿرين فارموليشن جو LC50 273.41 μg L−1 هو. ڪرونڪ ٽيسٽ ۾، سڀ کان وڌيڪ ڪنسنٽريشن (20 μg L−1) جي نتيجي ۾ 50٪ کان وڌيڪ موت واقع ٿي، ڇاڪاڻ ته ان ٽيسٽ ڪيل ٽيڊپولز جي اڌ کي ماري ڇڏيو. مائڪرو نيوڪليس ٽيسٽ 6 ۽ 20 μg L−1 تي اهم نتيجا ڏيکاريا ۽ ڪيتريون ئي نيوڪليئر غير معموليات معلوم ڪيون ويون، جيڪي ظاهر ڪن ٿيون ته ڪمرشل سائپرميٿرين فارموليشن ۾ پي. گريسيلس جي خلاف جينوٽڪسڪ صلاحيت آهي. سائپرميٿرين هن نسل لاءِ هڪ وڏو خطرو آهي، جيڪو ظاهر ڪري ٿو ته اهو ڪيترائي مسئلا پيدا ڪري سگهي ٿو ۽ مختصر ۽ ڊگهي مدت ۾ هن ماحولياتي نظام جي حرڪيات کي متاثر ڪري سگهي ٿو. تنهن ڪري، اهو نتيجو ڪڍي سگهجي ٿو ته تجارتي سائپرميٿرين فارموليشن پي. گريسيليس تي زهريلا اثر رکن ٿا.
زرعي سرگرمين جي مسلسل واڌ ۽ ان جي شديد استعمال جي ڪريجيتن جو ڪنٽرولماپون، آبي جانور اڪثر ڪري جراثيم ڪش دوائن جي سامهون ايندا آهن 1,2. زرعي شعبن جي ويجهو پاڻي جي وسيلن جي آلودگي غير نشانو جاندارن جهڙوڪ ايمفيبين جي ترقي ۽ بقا کي متاثر ڪري سگهي ٿي.
ماحولياتي ميٽرڪس جي تشخيص ۾ ايمفيبينز تيزي سان اهم ٿي رهيا آهن. انوران کي ماحولياتي آلودگي جا سٺا بايو انڊيڪيٽر سمجهيو ويندو آهي ڇاڪاڻ ته انهن جي منفرد خاصيتن جهڙوڪ پيچيده زندگي جي چڪر، تيز لاروا جي واڌ جي شرح، ٽرافڪ حيثيت، پارگميبل چمڙي 10,11، پيدائش لاءِ پاڻي تي انحصار 12 ۽ غير محفوظ آنا 11,13,14. ننڍڙو پاڻي وارو ڏيڏر (Physalaemus gracilis)، جيڪو عام طور تي روئندڙ ڏيڏر جي نالي سان سڃاتو وڃي ٿو، کي جراثيم ڪش آلودگي 4,5,6,7,15 جي هڪ بايو انڊيڪيٽر نسل طور ڏيکاريو ويو آهي. هي نسل ارجنٽائن، يوراگوئي، پيراگوئي ۽ برازيل ۾ بيٺل پاڻي، محفوظ علائقن يا متغير رهائش وارن علائقن ۾ ملي ٿو 1617 ۽ IUCN جي درجه بندي پاران ان جي وسيع ورڇ ۽ مختلف رهائش جي برداشت جي ڪري مستحڪم سمجهيو ويندو آهي 18.
سائپرميٿرين جي نمائش کان پوءِ ايمفيبين ۾ ذيلي خطرناڪ اثرات جي رپورٽ ڪئي وئي آهي، جنهن ۾ ٽيڊپولز ۾ رويي، مورفولوجيڪل ۽ بايو ڪيميڪل تبديليون 23،24،25، تبديل ٿيل موت ۽ ميٽامورفوسس جو وقت، اينزيميٽڪ تبديليون، هڏن جي ڪاميابي ۾ گهٽتائي 24،25، هائپر ايڪٽيويٽي 26، ڪولينسٽريس سرگرمي جي روڪٿام 27 ۽ ترڻ جي ڪارڪردگي ۾ تبديليون 7،28 شامل آهن. تاهم، ايمفيبين ۾ سائپرميٿرين جي جينوٽڪسڪ اثرات جا مطالعو محدود آهن. تنهن ڪري، سائپرميٿرين جي لاءِ انوران نسل جي حساسيت جو جائزو وٺڻ ضروري آهي.
ماحولياتي آلودگي امفيبين جي عام واڌ ۽ ترقي کي متاثر ڪري ٿي، پر سڀ کان وڌيڪ سنگين خراب اثر جينياتي نقصان آهي جيڪو جينياتي نقصان آهي جيڪو جراثيم ڪش جي نمائش جي ڪري ٿئي ٿو 13. رت جي سيل مورفولوجي تجزيو آلودگي ۽ جهنگلي نسلن لاءِ ڪنهن مادو جي امڪاني زهر جي هڪ اهم بايو انڊيڪيٽر آهي 29. مائڪرو نيوڪليس ٽيسٽ ماحول ۾ ڪيميائي مادن جي جينوٽڪسيسيٽي کي طئي ڪرڻ لاءِ سڀ کان وڌيڪ استعمال ٿيندڙ طريقن مان هڪ آهي 30. اهو هڪ تيز، اثرائتو ۽ سستو طريقو آهي جيڪو جاندارن جي ڪيميائي آلودگي جو هڪ سٺو اشارو آهي جهڙوڪ امفيبين 31,32 ۽ جينوٽڪسڪ آلودگي جي نمائش بابت معلومات مهيا ڪري سگهي ٿو 33.
هن مطالعي جو مقصد مائڪرو نيوڪليس ٽيسٽ ۽ ماحولياتي خطري جي تشخيص جي استعمال سان ننڍڙن آبي ٽيڊپولز تي تجارتي سائپرميٿرين فارموليشن جي زهر جي صلاحيت جو جائزو وٺڻ هو.
ٽيسٽ جي تيز دور دوران ڪمرشل سائپرميٿرين جي مختلف ڪنسنٽريشن جي سامهون ايندڙ پي. گريسيليس ٽيڊپولز جي مجموعي موت (٪).
دائمي ٽيسٽ دوران ڪمرشل سائپرميٿرين جي مختلف ڪنسنٽريشن جي سامهون ايندڙ پي. گريسيليس ٽيڊپولز جي مجموعي موت (٪).
ڏٺو ويو اعليٰ موت جي شرح سائپرميٿرين جي مختلف ڪنسنٽريشنز (6 ۽ 20 μg/L) جي سامهون ايندڙ امفيبين ۾ جينوٽڪسڪ اثرات جو نتيجو هو، جيئن مائڪرو نيوڪلئي (MN) جي موجودگي ۽ erythrocytes ۾ نيوڪليئر غيرمعموليات مان ظاهر ٿئي ٿو. MN جي ٺهڻ mitosis ۾ غلطين جي نشاندهي ڪري ٿي ۽ ڪروموسومز جي مائڪروٽيوبولس سان خراب پابند، ڪروموسومز جي اپٽيڪ ۽ ٽرانسپورٽ لاءِ ذميوار پروٽين ڪمپليڪس ۾ خرابيون، ڪروموسومز جي الڳ ٿيڻ ۾ غلطيون ۽ ڊي اين اي نقصان جي مرمت ۾ غلطيون 38,39 سان لاڳاپيل آهن ۽ شايد جراثيم ڪش آڪسائيڊيوٽيو دٻاءُ 40,41 سان لاڳاپيل هجن. جائزو ورتل سڀني ڪنسنٽريشنز تي ٻيون غيرمعموليات ڏٺيون ويون. سائپرميٿرين جي ڪنسنٽريشن ۾ واڌ سان erythrocytes ۾ ايٽمي غيرمعموليات ۾ ترتيب وار 5% ۽ 20% گهٽ ۾ گهٽ (1 μg/L) ۽ سڀ کان وڌيڪ (20 μg/L) دوز تي وڌي ويا. مثال طور، هڪ نسل جي ڊي اين اي ۾ تبديليون مختصر ۽ ڊگهي مدت جي بقا لاءِ سنگين نتيجا ڏئي سگهن ٿيون، جنهن جي نتيجي ۾ آبادي ۾ گهٽتائي، پيداواري صحت ۾ تبديلي، نسل وڌائڻ، جينياتي تنوع جو نقصان، ۽ منتقلي جي شرح ۾ تبديلي اچي ٿي. اهي سڀ عنصر نسلن جي بقا ۽ سار سنڀال تي اثر انداز ٿي سگهن ٿا 42,43. ايريٿرائڊ غيرمعموليات جي ٺهڻ سائٽوڪائنيسس ۾ رڪاوٽ جي نشاندهي ڪري سگهي ٿي، جنهن جي نتيجي ۾ غير معمولي سيل ڊويزن (بائنوڪليٽيڊ ايريٿرائڊ سائٽس) 44,45؛ ملٽي لوبڊ نيوڪليئر ڪيترن ئي لوبز سان نيوڪليئر جھلي جا پروٽروشن آهن 46، جڏهن ته ٻيا ايريٿرائڊ غيرمعموليات ڊي اين اي امپليفڪيشن سان لاڳاپيل ٿي سگهن ٿا، جهڙوڪ نيوڪليئر گردا/بلبز 47. اينوڪليٽيڊ ايريٿرائڊ سائٽس جي موجودگي خراب آڪسيجن ٽرانسپورٽ جي نشاندهي ڪري سگهي ٿي، خاص طور تي آلوده پاڻي ۾ 48,49. اپوپٽوسس سيل جي موت کي ظاهر ڪري ٿو 50.
ٻين مطالعي ۾ سائپرميٿرين جي جينوٽڪسڪ اثرات پڻ ظاهر ڪيا ويا آهن. ڪبانا ۽ ٻيا.51 96 ڪلاڪن تائين سائپرميٿرين (5000 ۽ 10,000 μg L−1) جي اعلي ڪنسنٽريشن جي نمائش کان پوءِ اوڊونٽوفرينس آمريڪنس سيلز ۾ مائڪرو نيوڪلئي ۽ نيوڪليئر تبديلين جهڙوڪ بائن نيوڪلئيٽڊ سيلز ۽ اپوپٽوٽڪ سيلز جي موجودگي جو مظاهرو ڪيو. سائپرميٿرين-حوصلہ افزائي اپوپٽوسس پڻ پي. بليگونيگرس 52 ۽ رائنلا ارينارم 53 ۾ دريافت ڪيو ويو. اهي نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته سائپرميٿرين جا آبي جاندارن جي هڪ حد تي جينوٽڪسڪ اثر آهن ۽ اهو ته MN ۽ ENA امتحان امفيبين تي ذيلي خطرناڪ اثرات جو اشارو ٿي سگهي ٿو ۽ مقامي نسلن ۽ جهنگلي آبادي تي لاڳو ٿي سگهي ٿو زهر جي سامهون 12.
سائپرميٿرين جي تجارتي فارموليشن هڪ اعليٰ ماحولياتي خطرو پيدا ڪري ٿي (شديد ۽ دائمي ٻئي)، جنهن جو هيڊ ڪوارٽر آمريڪي ماحولياتي تحفظ ايجنسي (EPA) جي سطح 54 کان وڌيڪ آهي جيڪو ماحول ۾ موجود هجڻ تي نسلن تي منفي اثر انداز ٿي سگهي ٿو. دائمي خطري جي تشخيص ۾، موت جي شرح لاءِ NOEC 3 μg L−1 هو، جيڪو تصديق ڪري ٿو ته پاڻي ۾ مليل ڪنسنٽريشن نسلن لاءِ خطرو پيدا ڪري سگهي ٿو55. اينڊوسلفان ۽ سائپرميٿرين جي ميلاپ جي سامهون ايندڙ R. arenarum لاروا لاءِ موتمار NOEC 168 ڪلاڪن کان پوءِ 500 μg L−1 هو؛ هي قدر 336 ڪلاڪن کان پوءِ 0.0005 μg L−1 تائين گهٽجي ويو. ليکڪ ڏيکارين ٿا ته جيترو ڊگهو نمائش، اوترو ئي گهٽ ڪنسنٽريشن جيڪي نسلن لاءِ نقصانڪار آهن. اهو پڻ اجاگر ڪرڻ ضروري آهي ته NOEC قدر ساڳئي نمائش وقت P. gracilis جي ڀيٽ ۾ وڌيڪ هئا، اهو ظاهر ڪري ٿو ته سائپرميٿرين جي نسلن جو ردعمل نسلن لاءِ مخصوص آهي. وڌيڪ، موت جي لحاظ کان، سائپرميٿرين جي نمائش کان پوءِ پي. گريسيلس جي CHQ قدر 64.67 تي پهچي وئي، جيڪا آمريڪي ماحولياتي تحفظ ايجنسي 54 پاران مقرر ڪيل حوالي جي قدر کان وڌيڪ آهي، ۽ آر. آرينرم لاروا جي CHQ قدر پڻ هن قدر کان وڌيڪ هئي (CHQ > 388.00 336 ڪلاڪن کان پوءِ)، اهو ظاهر ڪري ٿو ته مطالعي ڪيل حشرات ڪيترن ئي ايمفيبين نسلن لاءِ هڪ وڏو خطرو پيدا ڪن ٿا. انهي ڳالهه تي غور ڪندي ته پي. گريسيلس کي ميٽامورفوسس 56 مڪمل ڪرڻ لاءِ تقريبن 30 ڏينهن جي ضرورت آهي، اهو نتيجو ڪڍي سگهجي ٿو ته سائپرميٿرين جي مطالعي ڪيل ڪنسنٽريشن متاثر ٿيل ماڻهن کي ننڍي عمر ۾ بالغ يا پيدائش واري مرحلي ۾ داخل ٿيڻ کان روڪي آبادي ۾ گهٽتائي ۾ حصو وٺي سگهي ٿي.
مائڪرو نيوڪلئي ۽ ٻين erythrocyte nuclear abnormalities جي حساب ڪيل خطري جي تشخيص ۾، CHQ قدر 14.92 کان 97.00 تائين هئا، جيڪو ظاهر ڪري ٿو ته سائپرميٿرين کي ان جي قدرتي رهائش ۾ به P. gracilis لاءِ هڪ امڪاني جينوٽڪسڪ خطرو هو. موت جي شرح کي نظر ۾ رکندي، P. gracilis لاءِ برداشت ڪرڻ لائق زينوبيوٽڪ مرکبات جي وڌ ۾ وڌ ڪنسنٽريشن 4.24 μg L−1 هئي. جڏهن ته، 1 μg/L تائين گهٽ ڪنسنٽريشن پڻ جينوٽڪسڪ اثرات ڏيکاريا. هي حقيقت غير معمولي فردن جي تعداد ۾ واڌ جو سبب بڻجي سگهي ٿي57 ۽ انهن جي رهائش ۾ نسلن جي ترقي ۽ پيداوار کي متاثر ڪري سگهي ٿي، جنهن جي ڪري امفيبين آبادي ۾ گهٽتائي اچي ٿي.
جراثيم ڪش سائپرميٿرين جي تجارتي فارموليشنز پي. گريسيلس لاءِ تيز تيز ۽ دائمي زهر ڏيکاريا. وڌيڪ موت جي شرح ڏٺي وئي، ممڪن طور تي زهر جي اثرن جي ڪري، جيئن مائڪرو نيوڪلئي ۽ ايريٿروسائيٽ نيوڪليئر غير معموليات جي موجودگي، خاص طور تي سيرٽيڊ نيوڪلئي، لوبڊ نيوڪلئي، ۽ ويسڪيولر نيوڪلئي جي موجودگي مان ظاهر ٿئي ٿو. ان کان علاوه، مطالعي ڪيل نسلن ماحولياتي خطرن ۾ اضافو ڏيکاريو، تيز ۽ دائمي ٻنهي. اهي ڊيٽا، اسان جي ريسرچ گروپ پاران پوئين مطالعي سان گڏ، ڏيکاريا ته سائپرميٿرين جي مختلف تجارتي فارموليشنز اڃا تائين ايسٽيل ڪولينسٽريس (AChE) ۽ بائيٽيرائل ڪولينسٽريس (BChE) سرگرمين ۽ آڪسائيڊائٽي دٻاءُ ۾ گهٽتائي جو سبب بڻيا58، ۽ نتيجي ۾ پي. گريسيلس ۾ ترڻ جي سرگرمي ۽ زباني خرابي ۾ تبديليون59، ظاهر ڪن ٿيون ته سائپرميٿرين جي تجارتي فارموليشنز هن نسل لاءِ وڌيڪ خطرناڪ ۽ ذيلي موتمار زهر آهن. هارٽمن ۽ ٻيا. 60 ڏٺائين ته سائپرميٿرين جا تجارتي فارموليشنز پي. گريسيلس ۽ ساڳئي جينس جي هڪ ٻي نسل (P. cuvieri) لاءِ نو ٻين جراثيم ڪش دوائن جي مقابلي ۾ سڀ کان وڌيڪ زهر هئا. ان مان ظاهر ٿئي ٿو ته ماحولياتي تحفظ لاءِ سائپرميٿرين جي قانوني طور تي منظور ٿيل ڪنسنٽريشن جي نتيجي ۾ موت جي شرح وڌيڪ ۽ آبادي ۾ ڊگهي مدت جي گهٽتائي ٿي سگهي ٿي.
ايمفيبينز لاءِ جراثيم ڪش جي زهر جو جائزو وٺڻ لاءِ وڌيڪ مطالعي جي ضرورت آهي، ڇاڪاڻ ته ماحول ۾ مليل ڪنسنٽريشن وڌيڪ موت جو سبب بڻجي سگهي ٿو ۽ پي. گريسيليس لاءِ امڪاني خطرو پيدا ڪري سگهي ٿو. ايمفيبينز جي نسلن تي تحقيق جي حوصلا افزائي ڪئي وڃي، ڇاڪاڻ ته انهن جاندارن تي ڊيٽا گهٽ آهي، خاص طور تي برازيل جي نسلن تي.
دائمي زهر جو امتحان جامد حالتن ۾ 168 ڪلاڪ (7 ڏينهن) تائين هليو ۽ ذيلي زهر جي مقدار هي هئي: 1، 3، 6 ۽ 20 μg ai L−1. ٻنهي تجربن ۾، هر علاج گروپ ۾ 10 ٽيڊپولز جو جائزو ڇهن نقلن سان ڪيو ويو، هر ڪنسنٽريشن ۾ ڪل 60 ٽيڊپولز هئا. ان دوران، صرف پاڻي جي علاج هڪ منفي ڪنٽرول طور ڪم ڪيو. هر تجرباتي سيٽ اپ ۾ هڪ جراثيم کان پاڪ شيشي جي ڊش شامل هئي جنهن جي گنجائش 500 ملي ليٽر هئي ۽ 50 ملي ليٽر حل ۾ 1 ٽيڊپول جي کثافت هئي. فلاسڪ کي بخارات کي روڪڻ لاءِ پوليٿيلين فلم سان ڍڪيل هو ۽ مسلسل هوا ڏني وئي.
پاڻي جو ڪيميائي تجزيو 0، 96، ۽ 168 ڪلاڪ تي جراثيم ڪش دوائن جي ڪنسنٽريشن کي طئي ڪرڻ لاءِ ڪيو ويو. سبين ۽ ٻين جي مطابق. 68 ۽ مارٽنس ۽ ٻين. 69، تجزيا فيڊرل يونيورسٽي آف سانتا ماريا جي جراثيم ڪش تجزيي ليبارٽري (LARP) ۾ گيس ڪروميٽوگرافي کي ٽرپل ڪواڊروپول ماس اسپيڪٽروميٽري (ويرين ماڊل 1200، پالو آلٽو، ڪيليفورنيا، آمريڪا) سان ملائي استعمال ڪندي ڪيا ويا. پاڻي ۾ جراثيم ڪش دوائن جي مقداري تعين کي اضافي مواد طور ڏيکاريو ويو آهي (ٽيبل SM1).
مائڪرو نيوڪليس ٽيسٽ (MNT) ۽ ريڊ سيل نيوڪليئر غيرمعمولي ٽيسٽ (RNA) لاءِ، هر علاج گروپ مان 15 ٽيڊپولز جو تجزيو ڪيو ويو. ٽيڊپولز کي 5٪ لڊوڪائن (50 mg g-170) سان بي هوشي ڪئي وئي ۽ رت جا نمونا ڊسپوزيبل هيپرينائيزڊ سرنج استعمال ڪندي ڪارڊيڪ پنڪچر ذريعي گڏ ڪيا ويا. رت جا نشان جراثيم کان پاڪ مائڪروسڪوپ سلائيڊز تي تيار ڪيا ويا، هوا ۾ خشڪ ڪيا ويا، 100٪ ميٿانول (4 °C) سان 2 منٽن لاءِ مقرر ڪيا ويا، ۽ پوءِ اونداهي ۾ 15 منٽن لاءِ 10٪ گيمسا محلول سان داغ ڏنا ويا. عمل جي آخر ۾، سلائيڊز کي ڊسٽلڊ پاڻي سان ڌوئي اضافي داغ کي ختم ڪيو ويو ۽ ڪمري جي حرارت تي خشڪ ڪيو ويو.
هر ٽيڊپول مان گهٽ ۾ گهٽ 1000 آر بي سيز جو تجزيو 100× مائڪروسڪوپ استعمال ڪندي ڪيو ويو جنهن جو مقصد 71 هو MN ۽ ENA جي موجودگي کي طئي ڪرڻ لاءِ. ٽيڊپولز مان ڪل 75,796 آر بي سيز جو جائزو سائپرميٿرين ڪنسنٽريشن ۽ ڪنٽرول کي غور ۾ رکندي ڪيو ويو. جينوٽڪسيسيٽي جو تجزيو ڪاراسڪو ۽ ٻين جي طريقي مطابق ڪيو ويو. ۽ فينچ ۽ ٻين جي طريقي سان. 38,72 هيٺ ڏنل ايٽمي زخمن جي تعدد کي طئي ڪندي: (1) اينوڪيليٽ سيلز: نيوڪلئيٽ کان سواءِ سيلز؛ (2) اپوپٽوٽڪ سيلز: نيوڪلئيٽ ٽڪراءُ، پروگرام ٿيل سيل ڊيٿ؛ (3) بائنوڪيليٽ سيلز: ٻن نيوڪلئيٽ سان سيلز؛ (4) نيوڪلئيٽ بڊز يا بلب سيلز: نيوڪلئيٽ جھلي جي ننڍڙن پروٽروشن سان سيلز، مائڪرو نيوڪلئي جي سائيز ۾ بلب؛ (5) ڪيريولائيزڊ سيلز: اندروني مواد کان سواءِ صرف نيوڪلئيس جي خاڪي سان سيلز؛ (6) نوچڊ سيلز: نيوڪلئي سان سيلز جن کي انهن جي شڪل ۾ واضح دراڙ يا نوچ پڻ سڏيو ويندو آهي؛ (7) لوبليٽيڊ سيلز: مٿي ذڪر ڪيل ويسيڪلز کان وڏا نيوڪليئر پروٽروشنز وارا سيلز؛ ۽ (8) مائڪرو سيلز: ڪنڊينسڊ نيوڪلئي ۽ گهٽ ٿيل سائيٽوپلازم سان سيلز. تبديلين جو مقابلو منفي ڪنٽرول نتيجن سان ڪيو ويو.
ايڪيوٽ ٽوڪسيسيٽي ٽيسٽ جا نتيجا (LC50) GBasic سافٽ ويئر ۽ TSK-ٽرمڊ اسپيئرمين-ڪاربر طريقو 74 استعمال ڪندي تجزيو ڪيا ويا. دائمي ٽيسٽ ڊيٽا کي غلطي جي نارملٽي (شاپيرو-ولڪس) ۽ ويرينس جي هڪجهڙائي (بارٽليٽ) لاءِ اڳ ۾ جانچيو ويو. نتيجن جو تجزيو ويرينس جي هڪ طرفي تجزيي (ANOVA) استعمال ڪندي ڪيو ويو. ٽوڪي جو ٽيسٽ پاڻ ۾ ڊيٽا جي مقابلي لاءِ استعمال ڪيو ويو، ۽ ڊنيٽ جو ٽيسٽ علاج گروپ ۽ منفي ڪنٽرول گروپ جي وچ ۾ ڊيٽا جي مقابلي لاءِ استعمال ڪيو ويو.
LOEC ۽ NOEC ڊيٽا جو تجزيو ڊنيٽ جي ٽيسٽ استعمال ڪندي ڪيو ويو. شمارياتي ٽيسٽ Statistica 8.0 سافٽ ويئر (StatSoft) استعمال ڪندي ڪيا ويا جن جي اهميت جي سطح 95٪ (p < 0.05) هئي.