فاسفوريليشن ماسٽر گروٿ ريگيوليٽر ڊيلا کي چالو ڪري ٿو، جيڪو عربيڊوپسس ۾ ڪروميٽين سان هسٽون H2A جي پابند ٿيڻ کي فروغ ڏئي ٿو.

ڊيلا پروٽين محفوظ آهنواڌ ريگيوليٽرجيڪي اندروني ۽ ٻاهرين سگنلن جي جواب ۾ ٻوٽن جي ترقي ۾ مرڪزي ڪردار ادا ڪن ٿا. ٽرانسڪرپشنل ريگيوليٽر جي طور تي، ڊي ايل اي پنهنجي GRAS ڊومينز ذريعي ٽرانسڪرپشن فيڪٽرز (TFs) ۽ هسٽون H2A سان ڳنڍيل آهن ۽ پروموٽرز تي عمل ڪرڻ لاءِ ڀرتي ڪيا ويا آهن. تازين مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته ڊي ايل اي استحڪام کي ترجمي کان پوءِ ٻن ميڪانيزم ذريعي منظم ڪيو ويندو آهي: ٻوٽن جي هارمون پاران پيدا ٿيندڙ پوليوبائيڪيٽيشنگِبريلِن، جيڪو انهن جي تيزيءَ سان خراب ٿيڻ جو سبب بڻجي ٿو، ۽ ننڍي ubiquitin جهڙي موڊيفائر (SUMO) سان ملائي ٿو، جيڪو انهن جي جمع کي وڌائي ٿو. ان کان علاوه، DELLA سرگرمي کي متحرڪ طور تي ٻن مختلف گلائڪوسائيليشن ميڪانيزم ذريعي منظم ڪيو ويندو آهي: O-fucosylation DELLA-TF رابطي کي وڌائيندو آهي، جڏهن ته O-linked N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) تبديلي DELLA-TF رابطي کي روڪيندي آهي. بهرحال، DELLA فاسفوريليشن جو ڪردار واضح ناهي ڇاڪاڻ ته پوئين مطالعي متضاد نتيجا ڏيکاريا آهن، ڪجهه تجويز ڪن ٿا ته فاسفوريليشن DELLA جي خراب ٿيڻ کي فروغ ڏئي ٿو يا دٻائي ٿو ۽ ٻيا تجويز ڪن ٿا ته فاسفوريليشن انهن جي استحڪام کي متاثر نٿو ڪري. هتي، اسان GA1-3 ريپريسر (RGA)، AtDELLA ۾ فاسفوريليشن سائيٽن جي سڃاڻپ ڪريون ٿا، جيڪو ماس اسپيڪٽروميٽري ذريعي Arabidopsis thaliana کان پاڪ ڪيو ويو آهي ۽ ڏيکاريون ٿا ته PolyS ۽ PolyS/T علائقن ۾ ٻن RGA پيپٽائڊس جو فاسفوريليشن H2A بائنڊنگ ۽ ٽارگيٽ پروموٽرز سان RGA ايسوسيئيشن کي فروغ ڏيندي RGA سرگرمي کي وڌائي ٿو. خاص طور تي، فاسفوريليشن RGA-TF رابطي يا RGA استحڪام کي متاثر نه ڪيو. اسان جو مطالعو هڪ ماليڪيولر ميڪانيزم کي ظاهر ڪري ٿو جنهن ذريعي فاسفوريليشن ڊي ايل اي سرگرمي کي متاثر ڪري ٿي.
اسان جي ماس اسپيڪٽروميٽرڪ تجزيي مان ظاهر ٿيو ته GA جي گهٽتائي واري Ga1 پس منظر ۾ Pep1 ۽ Pep2 ٻئي RGA ۾ تمام گهڻو فاسفوريليٽ ٿيل هئا. هن مطالعي کان علاوه، فاسفوپروٽيومڪ مطالعي پڻ RGA ۾ Pep1 فاسفوريليشن کي ظاهر ڪيو آهي، جيتوڻيڪ ان جي ڪردار جو اڃا تائين مطالعو نه ڪيو ويو آهي53,54,55. ان جي ابتڙ، Pep2 فاسفوريليشن کي اڳ ۾ بيان نه ڪيو ويو آهي ڇاڪاڻ ته هي پيپٽائيڊ صرف RGAGKG ٽرانسجين استعمال ڪندي ڳولي سگهجي ٿو. جيتوڻيڪ m1A ميوٽيشن، جنهن Pep1 فاسفوريليشن کي ختم ڪيو، پلانٽا ۾ صرف ٿورو RGA سرگرمي کي گهٽايو، ان جو هڪ اضافي اثر هو جڏهن RGA سرگرمي کي گهٽائڻ ۾ m2A سان گڏ ڪيو ويو (ضمني شڪل 6). اهم طور تي، GA1 جي مقابلي ۾ GA-وڌايل sly1 ميوٽنٽ ۾ Pep1 فاسفوريليشن کي خاص طور تي گهٽايو ويو، اهو مشورو ڏئي ٿو ته GA RGA ڊيفاسفوريليشن کي فروغ ڏئي ٿو، ان جي سرگرمي کي گهٽائي ٿو. اهو طريقو جنهن ذريعي GA RGA فاسفوريليشن کي دٻائي ٿو، ان کي وڌيڪ تحقيق جي ضرورت آهي. هڪ امڪان اهو آهي ته اهو هڪ نامعلوم پروٽين ڪائنس جي ضابطي ذريعي حاصل ڪيو ويو آهي. جيتوڻيڪ مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته چانورن ۾ CK1 پروٽين ڪائنيز EL1 جو اظهار GA پاران گهٽجي ويو آهي 41، اسان جا نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته Arabidopsis EL1 homologue (AEL1-4) جي اعليٰ ترتيب واري ميوٽيشنز RGA فاسفوريليشن کي گهٽ نه ٿيون ڪن. اسان جي نتيجن سان متفق، Arabidopsis AEL اوور ايڪسپريسنگ لائينن ۽ هڪ ael ٽرپل ميوٽنٽ کي استعمال ڪندي هڪ تازي فاسفوريليشن پروٽوميڪ مطالعي انهن ڪائنيز 56 جي ذيلي ذخيري جي طور تي ڪنهن به DELLA پروٽين جي سڃاڻپ نه ڪئي. جڏهن اسان مسودو تيار ڪيو، اهو ٻڌايو ويو ته GSK3، ڪڻڪ ۾ GSK3/SHAGGY-جهڙو ڪائنيز کي انڪوڊ ڪندڙ جين (Triticum aestivum)، DELLA (Rht-B1b)57 کي فاسفوريليٽ ڪري سگهي ٿو، جيتوڻيڪ GSK3 پاران Rht-B1b جي فاسفوريليشن پلانٽا ۾ تصديق نه ڪئي وئي آهي. GSK3 جي موجودگي ۾ ان ويٽرو اينزيميٽڪ رد عمل ۽ بعد ۾ ماس اسپيڪٽروميٽري تجزيو Rht-B1b جي DELLA ۽ GRAS ڊومينز جي وچ ۾ واقع ٽي فاسفوريليشن سائيٽون ظاهر ڪيون (ضمني شڪل 3). ٽنهي فاسفوريليشن سائيٽن تي سيرين کان الانائن جي متبادل جي نتيجي ۾ ٽرانسجينڪ ڪڻڪ ۾ Rht-B1b سرگرمي گهٽجي وئي، اسان جي نتيجن سان مطابقت رکي ٿي ته Pep2 RGA ۾ الانائن جي متبادل RGA سرگرمي کي گهٽائي ڇڏيو. بهرحال، ان ويٽرو پروٽين ڊيگريڊيشن ايسز وڌيڪ ظاهر ڪيو ته فاسفوريليشن پڻ Rht-B1b57 کي مستحڪم ڪري سگهي ٿي. اهو اسان جي نتيجن جي برعڪس آهي جيڪو ڏيکاري ٿو ته Pep2 RGA ۾ الانائن جي متبادل پلانٽا ۾ ان جي استحڪام کي تبديل نه ڪندا آهن. ڪڻڪ ۾ GSK3 Arabidopsis 57 ۾ brassinosteroid-insensitive پروٽين 2 (BIN2) جو هڪ آرٿولوگ آهي. BIN2 BR سگنلنگ جو هڪ منفي ريگيوليٽر آهي، ۽ BR BIN2 ڊيگريڊيشن 58 جو سبب بڻجندي ان جي سگنلنگ رستي کي چالو ڪري ٿو. اسان ڏيکاريو ته BR علاج Arabidopsis ۾ RGA استحڪام 59 يا فاسفوريليشن جي سطح کي گهٽ نٿو ڪري (ضمني شڪل 2)، اهو مشورو ڏئي ٿو ته RGA کي BIN2 پاران فاسفوريليشن ٿيڻ جو امڪان ناهي.
سڀني مقداري ڊيٽا جو شمارياتي طور تي ايڪسل استعمال ڪندي تجزيو ڪيو ويو، ۽ شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ استعمال ڪندي اهم فرق طئي ڪيا ويا. نموني جي سائيز کي اڳ ۾ طئي ڪرڻ لاءِ ڪو به شمارياتي طريقو استعمال نه ڪيو ويو. تجزيو مان ڪو به ڊيٽا خارج نه ڪيو ويو؛ تجربو بي ترتيب نه ڪيو ويو؛ ۽ محقق تجربي ۽ نتيجن جي تشخيص دوران مختص ڪرڻ کان واقف هئا. نموني سائيز شڪل جي ڏند ڪٿا ۽ خام ڊيٽا فائلن ۾ مهيا ڪيا ويا آهن.