اينٿيلمنٽڪ دوا N,N-ڊائيٿائل-ايم-ٽولوامائيڊ (ڊي اي اي ٽي) کي AChE (acetylcholinesterase) کي روڪڻ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي ۽ ان ۾ گهڻي ويسڪولرائيزيشن جي ڪري امڪاني ڪارڪينوجينڪ خاصيتون آهن. هن پيپر ۾، اسان ڏيکاريون ٿا ته DEET خاص طور تي اينڊوٿيليل سيلز کي متحرڪ ڪري ٿو جيڪي اينجيوجينيسس کي فروغ ڏين ٿا، ان ڪري ٽيومر جي واڌ کي وڌائي ٿو. DEET سيلولر عملن کي چالو ڪري ٿو جيڪي اينجيوجينيسس ڏانهن وٺي وڃن ٿا، جن ۾ واڌ، منتقلي، ۽ چپکڻ شامل آهن. اهو اينڊوٿيليل سيلز ۾ NO پيداوار ۽ VEGF اظهار ۾ واڌ سان لاڳاپيل آهي. M3 کي خاموش ڪرڻ يا فارماسولوجيڪل M3 انبيٽرز کي استعمال ڪرڻ انهن سڀني اثرات کي ختم ڪري ڇڏيو، اهو مشورو ڏئي ٿو ته DEET-حوصلہ افزائي اينجيوجينيسس M3-حساس آهي. اينڊوٿيليل ۽ HEK سيلز ۾ ڪلسيم سگنلنگ شامل ڪرڻ جا تجربا جيڪي M3 ريڪٽرز کي اوور ايڪسپريس ڪن ٿا، انهي سان گڏ بائنڊنگ ۽ ڊاکنگ اسٽڊيز، ظاهر ڪن ٿا ته DEET M3 ريڪٽرز جي الوسٽرڪ ماڊيوليٽر طور ڪم ڪري ٿو. ان کان علاوه، DEET AChE کي روڪي ٿو، ان ڪري ايسٽيلڪولين جي بايو دستيابي ۽ M3 ريڪٽرز سان ان جي پابند کي وڌائي ٿو، ۽ الوسٽرڪ ريگيوليشن ذريعي پروانگيوجينڪ اثرات کي وڌائي ٿو.
پرائمري اي سيز کي سوئس چوٿين جي شريان کان الڳ ڪيو ويو. ڪڍڻ جو طريقو ڪوبايشي پروٽوڪول 26 مان ترتيب ڏنو ويو. مورين اي سيز کي چوٿين گذرڻ تائين 5٪ گرمي-غير فعال ايف بي ايس سان گڏ EBM-2 ميڊيم ۾ ڪلچر ڪيو ويو.
HUVEC، U87MG، يا BF16F10 جي واڌ ويجهه تي DEET جي ٻن ڪنسنٽريشن جو اثر CyQUANT Cell Proliferation Assay Kit (Molecular Probes، C7026) استعمال ڪندي تجزيو ڪيو ويو. مختصر طور تي، هر کوهه ۾ 5.103 سيلز کي 96 ويل پليٽ ۾ ٻج ڪيو ويو، رات جو ڳنڍڻ جي اجازت ڏني وئي، ۽ پوءِ 24 ڪلاڪن لاءِ DEET سان علاج ڪيو ويو. واڌ جي وچولي کي هٽائڻ کان پوءِ، مائڪرو پليٽ جي هر کوهه ۾ ڊائي بائنڊنگ محلول شامل ڪريو ۽ سيلز کي 37 °C تي 30 منٽن لاءِ انڪيوبيٽ ڪريو. فلوروسينس ليولز کي 485 nm ايڪسائيٽيشن فلٽر ۽ 530 nm ايميشن فلٽر سان ليس Mithras LB940 ملٽي موڊ مائڪرو پليٽ ريڊر (Berthold Technologies، Bad Wildbad، Germany) استعمال ڪندي طئي ڪيو ويو.
HUVEC کي 96 ويل پليٽن ۾ هر ويل 104 سيلز جي کثافت تي سيڊ ڪيو ويو. سيلز کي 24 ڪلاڪن لاءِ DEET سان علاج ڪيو ويو. ڪلوريميٽرڪ MTT ايسي (سگما-الڊرچ، M5655) استعمال ڪندي سيل جي قابليت جو جائزو ورتو ويو. آپٽيڪل ڊينسٽي ويليوز هڪ ملٽي موڊ مائڪروپليٽ ريڊر (ميٿراس LB940) تي 570 nm جي موج جي ڊيگهه تي حاصل ڪيا ويا.
DEET جي اثرن جو مطالعو ان ويٽرو اينجيوجينيسس ايسز استعمال ڪندي ڪيو ويو. 10-8 M يا 10-5 M DEET سان علاج HUVECs ۾ ڪيپيلري ڊيگهه جي ٺهڻ ۾ اضافو ڪيو (شڪل 1a، b، اڇا بار). ڪنٽرول گروپ جي مقابلي ۾، 10-14 کان 10-5 M تائين DEET ڪنسنٽريشن سان علاج ڏيکاريو ته ڪيپيلري ڊيگهه 10-8 M DEET تي هڪ پليٽو تي پهچي وئي (ضمني شڪل S2). 10-8 M ۽ 10-5 M جي ڪنسنٽريشن رينج ۾ DEET سان علاج ڪيل HUVECs جي ان ويٽرو پرو اينجيوجينڪ اثر ۾ ڪو به اهم فرق نه مليو.
نيوواسڪيولرائيزيشن تي DEET جي اثر کي طئي ڪرڻ لاءِ، اسان ان ويوو نيوواسڪيولرائيزيشن اسٽڊيز ڪيون. 14 ڏينهن کان پوءِ، 10-8 M يا 10-5 M DEET سان پري ڪلچر ٿيل اينڊوٿيليل سيلز سان انجڪشن ڪيل چوٿين هيموگلوبن جي مقدار ۾ اهم اضافو ڏيکاريو (شڪل 1c، اڇا بار).
وڌيڪ، DEET-induced neovascularization جو مطالعو U87MG زينوگرافٽ برداشت ڪندڙ چوٿين ۾ ڪيو ويو جيڪي روزانو (ip) DEET سان 10-5 M جي پلازما ڪنسنٽريشن کي وڌائڻ لاءِ معلوم ٿيل دوز تي انجڪشن ڪيا ويندا هئا، جيڪو بي نقاب انسانن ۾ عام آهي. 23 ۾. U87MG سيلز کي چوٿين ۾ انجيڪشن ڏيڻ کان 14 ڏينهن بعد سڃاڻپ ڪندڙ ٽيومر (يعني ٽيومر >100 mm3) ڏٺا ويا. 28 ڏينهن تي، ڪنٽرول چوٿين جي مقابلي ۾ DEET-علاج ٿيل چوٿين ۾ ٽيومر جي واڌ کي خاص طور تي وڌايو ويو (شڪل 1d، چورس). ان کان علاوه، ٽيومر جي CD31 اسٽيننگ ڏيکاري ٿي ته DEET ڪيپيلري ايريا کي خاص طور تي وڌايو پر مائڪرو ويسل کثافت کي نه. (شڪل 1e-g).
DETA-induced proliferation ۾ مسڪرينڪ ريڪٽرز جي ڪردار کي طئي ڪرڻ لاءِ، pFHHSiD (10-7 M، هڪ چونڊيل M3 ريڪٽر مخالف) جي موجودگي ۾ 10-8 M يا 10-5 M DETA استعمال ڪيو ويو. HUVEC جو علاج. pFHHSiD مڪمل طور تي سڀني ڪنسنٽريشن تي DETA جي proliferative ملڪيت کي بلاڪ ڪري ڇڏيو (ٽيبل 1).
انهن حالتن ۾، اسان اهو به جانچيو ته ڇا DEET HUVEC سيلز ۾ ڪيپيلري جي ڊيگهه وڌائيندو. ساڳئي طرح، pFHHSiD DEET-حوصلہ افزائي ڪيل ڪيپيلري جي ڊيگهه کي خاص طور تي روڪيو (شڪل 1a، b، گرين بار). ان کان علاوه، M3 siRNA سان ساڳيا تجربا ڪيا ويا. جيتوڻيڪ ڪنٽرول siRNA ڪيپيلري جي ٺهڻ کي فروغ ڏيڻ ۾ اثرائتو نه هو، M3 مسڪرينڪ ريڪٽر جي خاموشي DEET جي ڪيپيلري جي ڊيگهه وڌائڻ جي صلاحيت کي ختم ڪري ڇڏيو (شڪل 1a، b، ڪارا بار).
وڌيڪ، ٻئي 10-8 M يا 10-5 M DEET-induced vascularization in vitro ۽ neovascularization in vivo مڪمل طور تي pFHHSiD (شڪل 1c، d، حلقا) پاران بلاڪ ڪيا ويا هئا. اهي نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته DEET چونڊيل M3 ريڪٽر مخالفن يا M3 siRNA لاءِ حساس رستي ذريعي اينجيوجينيسس کي فروغ ڏئي ٿو.
AChE DEET جو ماليڪيولر ٽارگيٽ آهي. ڊونپيزل جهڙيون دوائون، جيڪي AChE انابيٽرز طور ڪم ڪن ٿيون، ان ويٽرو ۽ مائوس هينڊ لِمب اسڪيميا ماڊلز 14 ۾ EC اينجيوجينيسس کي متحرڪ ڪري سگهن ٿيون. اسان HUVEC ۾ AChE اينزائم سرگرمي تي DEET جي ٻن ڪنسنٽريشنز جي اثر جي جانچ ڪئي. DEET جي گھٽ (10-8 M) ۽ وڌيڪ (10-5 M) ڪنسنٽريشنز ڪنٽرول حالتن جي مقابلي ۾ اينڊوٿيليل AChE سرگرمي کي گھٽائي ڇڏيو (شڪل 2).
DEET جي ٻنهي ڪنسنٽريشن (10-8 M ۽ 10-5 M) HUVEC تي ايسٽيل ڪولينسٽريس سرگرمي کي گهٽايو. BW284c51 (10-5 M) ايسٽيل ڪولينسٽريس انابيٽرز لاءِ ڪنٽرول طور استعمال ڪيو ويو. نتيجا گاڏين سان علاج ٿيل سيلز جي مقابلي ۾ DEET جي ٻن ڪنسنٽريشن سان علاج ڪيل HUVEC تي AChE سرگرمي جي سيڪڙو جي طور تي ظاهر ڪيا ويا آهن. قدرن کي ڇهن آزاد تجربن جي اوسط ± SEM جي طور تي ظاهر ڪيو ويو آهي. *p < 0.05 ڪنٽرول جي مقابلي ۾ (ڪرسڪل-والس ۽ ڊن ملٽيپل مقابلي ٽيسٽ).
نائيٽرڪ آڪسائيڊ (NO) اينجيوجينڪ عمل 33 ۾ شامل آهي، تنهن ڪري، DEET-حوصلہ افزائي HUVECs ۾ NO پيداوار جو مطالعو ڪيو ويو. DEET-علاج ٿيل اينڊوٿيليل NO پيداوار ڪنٽرول سيلز جي مقابلي ۾ وڌي وئي، پر صرف 10-8 M جي دوز تي اهميت تي پهتي (شڪل 3c). DEET-حوصلہ افزائي NO پيداوار کي ڪنٽرول ڪندڙ ماليڪيولر تبديلين کي طئي ڪرڻ لاءِ، eNOS اظهار ۽ چالو ڪرڻ جو تجزيو مغربي بلوٽنگ ذريعي ڪيو ويو. جيتوڻيڪ DEET علاج eNOS اظهار کي تبديل نه ڪيو، ان eNOS فاسفوريليشن (شڪل 3d) ۾ علاج نه ٿيل سيلز جي مقابلي ۾ ان جي روڪي سائيٽ (Thr-495) کي گهٽائيندي ان جي چالو ڪرڻ واري سائيٽ (Ser-1177) تي eNOS فاسفوريليشن کي خاص طور تي وڌايو. ان کان علاوه، چالو ڪرڻ واري سائيٽ ۽ روڪي سائيٽ تي فاسفوريليشن eNOS جو تناسب اينزائم جي ڪل مقدار سان فاسفوريليشن eNOS جي مقدار کي معمول ڪرڻ کان پوءِ حساب ڪيو ويو. هي تناسب DEET جي هر ڪنسنٽريشن سان علاج ٿيل HUVECs ۾ غير علاج ٿيل سيلز جي مقابلي ۾ خاص طور تي وڌايو ويو (شڪل 3d).
آخرڪار، VEGF جي اظهار جو تجزيو، مکيه پرو اينجيوجينڪ عنصرن مان هڪ، مغربي بلوٽنگ ذريعي ڪيو ويو. DEET VEGF اظهار کي خاص طور تي وڌايو، جڏهن ته pFHHSiD هن اظهار کي مڪمل طور تي بلاڪ ڪيو.
جيئن ته DEET جا اثر فارماسولوجيڪل بلاڪڊ ۽ M3 ريڪٽرز جي ڊائون ريگيوليشن ٻنهي لاءِ حساس آهن، اسان هن مفروضي کي جانچيو ته DEET شايد ڪلسيم سگنلنگ کي وڌائي سگھي ٿو. حيرت انگيز طور تي، DEET HUVEC (ڊيٽا نه ڏيکاريل آهي) ۽ HEK/M3 (شڪل 4a، b) ۾ استعمال ٿيندڙ ٻنهي ڪنسنٽريشن لاءِ سائيٽوپلاسمڪ ڪلسيم کي وڌائڻ ۾ ناڪام ٿيو.
پوسٽ جو وقت: ڊسمبر-30-2024