ڪيڙا مار دوائون عالمي سطح تي خوراڪ جي کوٽ کي منهن ڏيڻ ۽ ویکٹر ذريعي پيدا ٿيندڙ انساني بيمارين کي منهن ڏيڻ ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿيون. بهرحال، ڪيڙن جي مزاحمت جي وڌندڙ مسئلي کي فوري طور تي نئين مرکبات جي دريافت جي ضرورت آهي جيڪي گهٽ استعمال ٿيندڙ هدفن کي نشانو بڻائين ٿا. ڪيڙن جي عارضي ريڪٽر پوٽينشل (TRPV) چينل - نانزونگ (نان) ۽ غير فعال (Iav) - هيٽرولوگس چينل (نان-آياو) ٺاهي سگهن ٿا ۽ ميڪانوسينسري عضون ڏانهن مقامي ٿي سگهن ٿا جيڪي ڪيڙن ۾ جيوٽروپزم، ٻڌڻ ۽ پروپريوسيپشن جي وچولي ڪن ٿا. ڪجهه ڪيڙا مار دوائون، جهڙوڪ افيڊوپائرولڊون (AP)، نامعلوم ميڪانيزم ذريعي نان-آياو کي نشانو بڻائين ٿيون. AP سوراخ ڪندڙ ڪيڙن (هيمپٽران) جي خلاف اثرائتو آهي، تنتن جي ڪم ۾ خلل وجهي کاڌ خوراڪ کي روڪي ٿو. AP صرف نان سان ڳنڍيل ٿي سگهي ٿو، پر صرف نان-آياو ايگونسٽ سان رابطو ڪري سگهي ٿو، جنهن ۾ اينڊوجينس نيڪوٽينامائيڊ (NAM) شامل آهن، ان ڪري چينل سرگرمي کي ظاهر ڪري ٿو. نان-آياو جي هڪ ڪيڙن جي نشانو جي صلاحيت جي باوجود، ان جي چينل اسيمبلي، ريگيوليٽري بائنڊنگ سائيٽن، ۽ Ca2+-انحصار ريگيوليشن بابت ٿورو ئي ڄاڻ آهي، جيڪو وڌيڪ ڪيڙن جي ترقي کي روڪي ٿو. هن مطالعي ۾، ڪرائو-اليڪٽران مائڪروسڪوپي استعمال ڪئي وئي ته جيئن هيمپٽيرا جيتن ۾ ڪيلموڊولين-ليگينڊ-مفت حالت ۾ نان-آئيو جي جوڙجڪ کي طئي ڪري سگهجي، انهي سان گڏ اينڪيرين ريپٽ سائيٽوپلاسمڪ ڊومين (ARD) جي حد تي AP ۽ NAM سان. حيرت انگيز طور تي، اسان ڏٺو ته نان پروٽين پاڻ هڪ پينٽامر ٺاهي سگهي ٿو، جيڪو AP-ثالثي ARD رابطي ذريعي مستحڪم ٿئي ٿو. هي مطالعو حشرات جي دوائن ۽ ايگونسٽ ۽ نان-آئيو جي وچ ۾ ماليڪيولر رابطي کي ظاهر ڪري ٿو، چينل فنڪشن ۽ اسيمبلي ۾ ARD جي اهميت کي اجاگر ڪري ٿو، ۽ Ca2+ ريگيوليشن جي ميڪانيزم کي ڳولي ٿو.
وڌندڙ سخت عالمي موسمياتي تبديلي جي پس منظر ۾، بگڙجندڙ عالمي خوراڪ جي حفاظت 21 صدي جي وڏن چئلينجن مان هڪ آهي، جنهن جا سماج لاءِ خطرناڪ نتيجا نڪرندا.1,2ورلڊ هيلٿ آرگنائيزيشن جي اسٽيٽ آف فوڊ سيڪيورٽي اينڊ نيوٽريشن ان دي ورلڊ 2023 (SOFI) رپورٽ جو اندازو آهي ته دنيا ۾ لڳ ڀڳ 2.33 بلين ماڻهو وچولي کان سخت خوراڪ جي عدم تحفظ جو شڪار آهن، جيڪو هڪ ڊگهو مسئلو آهي.3,4بدقسمتي سان، اندازاً 20٪ کان 30٪ يا وڌيڪ فصلن جي پيداوار هر سال جيتن ۽ پيٿوجنز جي ڪري ضايع ٿي ويندي آهي، ۽ گلوبل وارمنگ جي ڪري جيتن جي مزاحمت ۽ فصلن جي ڪمزوري ۾ اضافو ٿيڻ جو امڪان آهي.4,5,6,7,8جيت مار دوائن جي ترقي نه رڳو فصلن کي جيتن کان بچائڻ ۽ ویکٹر ذريعي پيدا ٿيندڙ پيٿوجنز جي پکيڙ کي گهٽائڻ لاءِ اهم آهي، پر ویکٹر ذريعي پيدا ٿيندڙ انساني بيمارين جهڙوڪ ڊينگي بخار، مليريا ۽ چاگس بيماري کي منهن ڏيڻ لاءِ پڻ اهم آهي، جيڪي جيت مار دوائن جي خلاف مزاحمت ۾ اضافو ڪري رهيا آهن.5,9,10,11
نيوروٽوڪسڪ حشرات مار دوائن جي مکيه هدفن ۾، هيٽروٽيٽرامرڪ ٽي آر پي وي چينل نانچنگ (نان)-انيڪٽو (آئي اي وي) صرف گذريل ڏهاڪي ۾ دريافت ڪيل حشرات مار هدفن جي هڪ طبقي جي نمائندگي ڪري ٿو، جنهن ۾ تجارتي طور تي دستياب حشرات مار دوائون جهڙوڪ اميڊيڪلوپريڊ ۽ پائراڪلوسٽروبن شامل آهن.12,13,14سيمي سنٿيٽڪ ڪيڙي مار دوا افيڊوپائروليفن (اي پي) هڪ تازو ترقي يافته ۽ تجارتي پيداوار آهي جنهن جو مکيه جزو فعال ڪيڙي مار دوا انسڪيلس® آهي، جيڪو اي پي کي هڪ سب نانومولر سرگرمي جي سطح تي ڳنڍي ٿو.15اي پي پولينٽر، فائديمند حشرات، ۽ ٻين غير نشانو جاندارن لاءِ گهٽ تيز زهر ڏيکاري ٿو، ۽ جڏهن ليبل جي هدايتن مطابق استعمال ڪيو وڃي ٿو، ته اهو ٻين حشرات جي دوائن جي مزاحمتي دٻاءُ کي گهٽائي سگهي ٿو.16،17،18نان ۽ آئيو وڏي پيماني تي ڪيڙن جي نسلن ۾ ورهايل آهن، صرف اينٽينا ۽ عضون جي ڪورڊل اسٽريچ ريڪٽر نيورون ۾ گڏيل طور تي ظاهر ٿين ٿا، ۽ ٻڌڻ، ڪشش ثقل جي تصور، ۽ پروپريوسيپشن لاءِ اهم آهن.13،16،19،20،21،22اي پي، اميڊيڪلوپريڊ، ۽ پيراڪلوسٽروبن هڪ منفرد ميڪانيزم ذريعي نان-آئي اي وي ڪمپليڪس کي متحرڪ ڪن ٿا، آخرڪار پروپرائيوسيپٽو سگنل ٽرانسڊڪشن کي روڪين ٿا.13,16,23سوراخ ڪندڙ جيتن (هيمپٽيران) جهڙوڪ افيڊس ۽ اڇي مکين ۾، پروپرائيوسيپشن جو نقصان انهن جي کاڌ خوراڪ جي صلاحيت کي متاثر ڪري ٿو، آخرڪار موت جو سبب بڻجي ٿو.13,24دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، AP نان-آئيو ڪمپليڪس لاءِ اعليٰ لاڳاپو ۽ صرف نان لاءِ گهٽ لاڳاپو ڏيکاري ٿو. AP جو نان-آئيو سان ڳنڍڻ هڪ برقي ڪرنٽ پيدا ڪري ٿو، پر صرف نان سان ڳنڍڻ چينل جي سرگرمي کي متحرڪ نٿو ڪري. Iav پاڻ بلڪل AP سان ڳنڍيل ناهي.16ان مان ظاهر ٿئي ٿو ته نان ۽ آئي اي وي مختلف نان-آئي اي وي چينل ڪمپليڪس ٺاهڻ لاءِ ڳنڍجي سگهن ٿا (مثال طور، مختلف اسٽوچيوميٽرڪ تناسب سان يا ساڳئي اسٽوچيوميٽرڪ تناسب اندر مختلف ترتيبن سان) يا اهو ته اي پي ڪيترن ئي سائيٽن سان ڳنڍجي سگهي ٿو. وڌيڪ، قدرتي ايگونسٽ نيڪوٽينامائيڊ (NAM) ڊروسوفلا نان-آئي اي وي سان مائڪرومولر لاڳاپي سان ڳنڍيل آهي، جيڪو ويٽرو ۾ افڊس (اي پي) جي اثرات وانگر ڏيکاري ٿو.16,25۽ افيڊ جي پيدائش ۽ کاڌ خوراڪ کي روڪي ٿو، آخرڪار انهن جي موت جو سبب بڻجندو آهي25,26. اهي ڊيٽا ڪيترائي سوال اٿارين ٿا. مثال طور، اهو واضح ناهي ته Nan-Iav هيٽروڊيمر ڪيئن ٺهي ٿو، ڪهڙيون پابند سائيٽون ننڍن ماليڪيولن کي ماڊل ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيون وينديون آهن، ۽ اهي ننڍڙا ماليڪيول پروپريوسيپشن کي دٻائيندي چينل جي ڪم کي ڪيئن منظم ڪن ٿا. وڌيڪ، اهي سبب ڇو Nan پاڻ غير فعال آهي ۽ AP لاءِ گهٽ لاڳاپو رکي ٿو، جڏهن ته Nan-Iav هيٽروڊيمر فعال آهي ۽ AP کي وڌيڪ لاڳاپي سان ڳنڍي ٿو، واضح ناهي. آخرڪار، Nan-Iav فنڪشن جي Ca2+-انحصار ريگيوليشن ۽ اهو ڪيئن نيورونل سگنلنگ عملن ۾ ضم ٿئي ٿو بابت ٿورو ئي معلوم آهي.. 13,21
هن مطالعي ۾، ڪرائو-اليڪٽران مائڪروسڪوپي، اليڪٽرروفيزيالوجي، ۽ ريڊيوليگينڊ بائنڊنگ ٽيڪنڪ کي گڏ ڪندي، اسان نان-آئي اي وي جي اسيمبلي ۽ ننڍڙن ماليڪيول ريگيوليٽرن سان ان جي پابند ٿيڻ جي ميڪانيزم کي واضح ڪيو. وڌيڪ، اسان آئيني طور تي پابند ڪيل ڪيلموڊولين (CaM) کي Iav ۽ AP-اسٽيبلائيزڊ نان پينٽامرز سان ڳولي لڌو. اهي نتيجا چينلن ۾ ڪيلشيم آئنز جي ضابطي، چينل اسيمبلي، ۽ ليگينڊ بائنڊنگ لاڳاپي کي طئي ڪرڻ وارن عنصرن ۾ اهم بصيرت فراهم ڪن ٿا. وڌيڪ اهم طور تي، اسان تصديق ڪئي ته ARD انهن عملن ۾ مرڪزي ڪردار ادا ڪري ٿو. لاڳاپيل زرعي جراثيم ڪش سان ڳنڍيل مڪمل حشرات چينلن جو اسان جو مطالعو27، 28، 29اهو جراثيم ڪش صنعت جي ترقي لاءِ امڪانن کي کوليندو آهي، جراثيم ڪش جي اثرائتي ۽ خاصيت کي بهتر بڻائيندو آهي، ۽ عالمي خوراڪ جي حفاظت ۽ ویکٹر ذريعي پيدا ٿيندڙ بيمارين جي پکيڙ کي منهن ڏيڻ لاءِ ٻين نسلن تي TRPV-هدف ٿيل مرکبات جي استعمال کي فعال بڻائيندو آهي.
اسان اهو پڻ ڏٺو ته Nan-Iav Ca2+ ذريعي منظم ڪيو ويندو آهي، ۽ ضابطي جو طريقو بنيادي طور تي پابند CaM ذريعي وچولي ڪيو ويندو آهي. اهم طور تي، CaM پاران Nav جو هي Ca2+-انحصار ڪندڙ ضابطو ٻين آئن چينلن (مثال طور، وولٽيج-گيٽ ٿيل Na+ چينلز ۽ TRPV5/6 چينلز) جي ضابطي جي طريقن کان خاص طور تي مختلف آهي.52,53,54,55,56,57. Nav1.2 چينل ۾، CaM جو سي-ٽرمينل ڊومين مددگار طور تي سي-ٽرمينل ڊومين (CTD) سان لاڳاپيل آهي، ۽ Ca2+ ان جي اين-ٽرمينل ڊومين کي CTD جي ڊسٽل حصي سان پابند ڪرڻ کي متاثر ڪري ٿو.56. TRPV5/6 چينل ۾، CaM جو C-ٽرمينل ڊومين CTH سان ڳنڍيل آهي، ۽ Ca2+ پنهنجي N-ٽرمينل ڊومين جي مٿي واري واڌ کي پور ۾ آڻيندو آهي، انهي ڪري ڪيشن پارگميتا کي روڪيندو آهي.53,54. اسان Nan-Iav-CaM جي Ca2+-منظم فنڪشن لاءِ هڪ ماڊل پيش ڪريون ٿا (شڪل 4h). هن ماڊل ۾، CaM جو N-ٽرمينل ڊومين بنيادي طور تي Iav جي C-ٽرمينل ڊومين (CTH) سان ڳنڍيل آهي. آرام واري حالت ۾ (گهٽ [Ca2+] ڪنسنٽريشن)، CaM جو C-ٽرمينل ڊومين Nan سان رابطو ڪري ٿو، ARD ڪنفرميشن کي مستحڪم ڪري ٿو ۽ ان ڪري چينل کولڻ کي فروغ ڏئي ٿو. چينل تي هڪ ايگونسٽ/ڪيت مار دوا جو پابند ڪرڻ سوراخ کولڻ کي متاثر ڪري ٿو، جنهن جي نتيجي ۾ Ca2+ انفلڪس ٿئي ٿو. Ca2+ پوءِ CaM سان ڳنڍيل آهي، جنهن جي ڪري Nan جي ARD کان C-ٽرمينل ڊومين جي الڳ ٿيڻ جو سبب بڻجندو آهي. ڇاڪاڻ ته CaM بائنڊنگ کي بلاڪ ڪرڻ بنيادي طور تي Ca2+ جي روڪيندڙ اثر کي ختم ڪري ٿو، هي الڳ ٿيڻ ARD موبلٽي کي ماڊل ڪري ٿو، جنهن جي ڪري Ca2+-انحصار واري انبيڪشن يا ڊيسينٽائيزيشن ٿئي ٿي. ڪيلشيم آئن ايليوشن کان پوءِ چينل ڪرنٽ جي تيز بحالي (شڪل 4g) اهو مشورو ڏئي ٿو ته هي ميڪانيزم Ca2+-ثالثي نيورونل سگنلن جي تيز ردعمل کي آسان بڻائي ٿو. وڌيڪ، Iav جو سي-ٽرمينل علائقو، جيڪو اڃا تائين خراب طور تي سمجهيو ويو آهي، چينل جي ٽارگيٽنگ ۽ موجوده ضابطن ۾ ٻيا ڪردار ادا ڪرڻ جي رپورٽ ڪئي وئي آهي.21
آخرڪار، اسان جو مطالعو زرعي اهميت جي هڪ حشرات مار-جراثيم مار TRP چينل ڪمپليڪس جي اعليٰ ريزوليوشن ڍانچي کي پيش ڪري ٿو - هڪ دريافت جيڪا اسان کي اڳ ۾ اڻڄاتل هئي. خاص طور تي، اسان انساني سيلن ۾ حشرات جي چينل جي جوڙجڪ ۽ ڪم کي بيان ڪيو (HEK293S GnTi–) جي بدران حشرات جي سيلن ۾. وڌندڙ حشرات مار مزاحمت ۽ کاڌي جي حفاظت ۽ پيٿوجنز تي جاري دٻاءُ جي منهن ۾، اسان جو ڪم اهم معلومات فراهم ڪري ٿو جيڪو انساني صحت ۽ عالمي خوراڪ جي حفاظت جي فائدي لاءِ نئين حشرات مار دوائن جي ترقي کي آسان بڻائيندو. مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته AP جهڙا حشرات مار دوائون ڪجهه جيتن جي خلاف اثرائتيون آهن جڏهن ليبل جي هدايتن مطابق استعمال ڪيون وينديون آهن ۽ فائديمند پولينٽر لاءِ گهٽ تيز زهر آهن، انهن جي ماحولياتي حفاظت جو مظاهرو ڪندي.13,16وڌيڪ، مڇرن تي ڪجهه AP ڊيريويٽوز جي جاچ مان ظاهر ٿيو آهي ته اهي آخرڪار اڏامڻ جي صلاحيت وڃائي ڇڏيندا آهن. اهو سمجهڻ ته اهي ماڊيوليٽنگ مرڪب نان-آئيو سان ڪيئن جڙيل آهن، موجوده مرڪبن جي ترميم يا وڌيڪ اثرائتي ۽صحيحجيتن تي ضابطو. اسان جو مطالعو اهو ظاهر ڪري ٿو ته Nan-Iav ARD انٽرفيس نه رڳو اندروني مرکبات، جراثيم ڪش دوائن، ۽ Ca2+-CaM جي سرگرمي کي منظم ڪرڻ لاءِ اهم آهي، پر چينل اسيمبلي لاءِ پڻ. اسان جو مشورو آهي ته ننڍن ماليڪيولن سان هيٽروڊيمر اسيمبلي کي خراب ڪرڻ آئن چينل انبيٽرز کي ترقي ڪرڻ لاءِ هڪ منفرد ۽ اميد افزا طريقو ٿي سگهي ٿو.
اٺن آرٿولوگس جينز مان، براؤن بيٽل (هاليومورفا هيليس) نانچنگ ۽ ان ايڪٽيو جي مڪمل ڊيگهه جينز کي چونڊيو ويو، جيڪي ڊٽرجنٽ ۾ بهترين استحڪام ڏيکاريندا هئا. ٺهيل جينز کي انساني اظهار لاءِ ڪوڊون-بهتر بڻايو ويو ۽ XhoI ۽ EcoRI پابندي سائيٽن کي استعمال ڪندي pBacMam pCMV-DEST ویکٹر (لائف ٽيڪنالاجيز) ۾ ڪلون ڪيو ويو. ان کي يقيني بڻايو ويو ته ڪلون سي-ٽرمينل GFP-FLAG-10xHis ۽ mCherry-FLAG-10xHis ٽيگ سان فريم ۾ هئا، جيڪي HRC-3C پروٽيز (PPX) پاران ڪليو ٿيل آهن، آزاد اجازت ڏين ٿا.اظهار. نانچنگ ۽ ان ايڪٽو کي pBacMam ویکٹر ۾ ڪلون ڪرڻ لاءِ استعمال ٿيندڙ پرائمر هن ريت هئا:
انفرادي ذرڙن جون خوردبيني تصويرون ٽائيٽن ڪريوس G2 ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروسڪوپ (FEI) تي حاصل ڪيون ويون، جيڪو K3 ڪئميرا ۽ گيٽن بايو ڪوانٽم انرجي فلٽر سان ليس هو. خوردبيني کي 300 keV تي هلايو ويو، جنهن جي توانائي سيٽنگ 20 eV هئي، هڪ نموني پکسل سائيز 1.08 Å/پڪسل (81,000x جي نامياري ميگنيفڪيشن)، ۽ هڪ ڊيفوڪس گريڊينٽ -0.8 کان -2.2 μm تائين هئي. وڊيو رڪارڊنگ 40 فريم في سيڪنڊ تي هڪ ليٽيٽيوڊ ايس مائڪروسڪوپ (گيٽن) استعمال ڪندي ڪئي وئي جنهن جي نامياري دوز جي شرح 25 e–px−1 s−1، نمائش جو وقت 2.4 s، ۽ ڪل دوز تقريبن 60 e–Å−2 هئي.
RELION 4.061 ۾ MotionCor2 استعمال ڪندي فلم تي بيم-انڊيوسڊ موشن ڪرڪشن ۽ ڊوز ويٽنگ ڪئي وئي. ڪنٽراسٽ ٽرانسفر فنڪشن (CTF) پيرا ميٽر جو اندازو cryoSPARC ۾ پيچ تي ٻڌل CTF تخميني طريقو 62 استعمال ڪندي ڪيو ويو. CTF فٽنگ ريزوليوشن ≥4 Å سان فوٽو مائڪروگرافس کي بعد جي تجزيي مان خارج ڪيو ويو. عام طور تي، cryoSPARC ۾ پوائنٽ جي چونڊ لاءِ 500-1000 فوٽو مائڪروگرافس جو هڪ ذيلي سيٽ استعمال ڪيو ويو، جنهن کان پوءِ ٽيمپليٽ تي ٻڌل پارٽيڪل چونڊ لاءِ هڪ واضح ريفرنس تصوير حاصل ڪرڻ لاءِ فلٽرنگ کان پوءِ 2D درجه بندي جا ڪيترائي دور ڪيا ويا. پوءِ ذرات کي 64-پڪسل باؤنڊنگ باڪس ۽ 4-فولڊ بائننگ استعمال ڪندي ڪڍيو ويو. ناپسنديده پارٽيڪل ڪيٽيگريز کي هٽائڻ لاءِ 2D درجه بندي جا ڪيترائي دور ڪيا ويا. شروعاتي 3D ماڊل کي ab initio reconstruction استعمال ڪندي ٻيهر تعمير ڪيو ويو ۽ cryoSPARC ۾ غير يونيفارم ريفائنمينٽ استعمال ڪندي بهتر ڪيو ويو. 3D درجه بندي cryoSPARC يا RELION ۾ ARD heterogeneity جي بنياد تي ڪئي وئي. جھلي ڊومينز جي ڪا به اهم heterogeneity نه ڏٺي وئي. ذرات کي C1 ۽ C2 طريقن سان بهتر ڪيو ويو؛ وڌيڪ C2 ريزوليوشن وارن ذرات کي C2 جي حوالي سان هم آهنگ سمجهيو ويو ۽ بيزين ريفائنمينٽ لاءِ RELION ۾ درآمد ڪيو ويو. پوءِ ذرات کي آخري غير يونيفارم ۽ مقامي ريفائنمينٽ لاءِ واپس cryoSPARC ڏانهن منتقل ڪيو ويو. آخري ريزوليوشن ۽ ذرڙن جي ڳڻپ ٽيبل 1 ۾ ڏيکاريل آهي.
جڏهن Nan+AP پينٽامرز کي پروسيس ڪيو ويو، اسان جھلي ڊومينز (خاص طور تي پوئر ريجن) جي ريزوليوشن کي بهتر بڻائڻ لاءِ مختلف طريقن جي ڳولا ڪئي، جهڙوڪ سگنل سبٽرڪشن ۽ TMD ماسڪنگ. بهرحال، اهي ڪوششون پوئر ريجن ۾ ممڪن طور تي انتهائي خرابي ۽ TMD جي مجموعي هيٽروجينيٽي جي ڪري ناڪام ٿيون. آخري ريزوليوشن جو حساب cryoSPARC ۾ غير يونيفارم پروسيسنگ طريقي سان خودڪار طريقي سان پيدا ٿيندڙ ماسڪ استعمال ڪندي ڪيو ويو، بنيادي طور تي ARD علائقي کي نشانو بڻايو ويو. هن جھلي ڊومينز (خاص طور تي VSLD علائقي) جي ڀيٽ ۾ تمام گهڻو وڌيڪ ريزوليوشن حاصل ڪيو.
نانچنگ ۽ غير فعال بگ جي اپو فارمن جا شروعاتي ڊي نوو ماڊل پهريون ڀيرو Coot63 استعمال ڪندي پيدا ڪيا ويا، ۽ نان ۽ Iav بگ جا ماڊل AlphaFold264 استعمال ڪندي گهٽ اعتماد وارن علائقن جي سڃاڻپ لاءِ ٺاهيا ويا. ڪالموڊيولن ماڊلنگ ترتيب وار PDB ايڪسيشنز 4JPZ56 ۽ 1CFD65 ۾ Ca2+-بائنڊنگ ۽ Ca2+-فري ماڊلز جي سخت جسم جي فٽ تي ٻڌل هئي. ماڊلز کي گولائي ريفائنمينٽ استعمال ڪندي بهتر ڪيو ويو ته جيئن صحيح اسٽيريو ڪيمسٽري ۽ سٺي جاميٽري کي يقيني بڻائي سگهجي. فاسفيٽيڊيلڪولين، فاسفيٽيڊيلٿانولامائن، ۽ فاسفيٽيڊيلسرين کي پوءِ چڱي طرح بيان ڪيل لپڊ کثافت جي طور تي ماڊل ڪيو ويو، ۽ NAM ۽ AP ليگنڊ کي تنگ جنڪشن ۾ لاڳاپيل کثافت ۾ رکيو ويو. PHENIX66 ۾ eLBOW استعمال ڪندي آئسفارمز جي SMILES اسٽرنگ مان پابندي فائلون ٺاهيون ويون. آخرڪار، ماڊلز کي PHENIX ۾ حقيقي جاءِ تي مقامي گرڊ ڳولا ۽ ثانوي جوڙجڪ جي پابندين سان عالمي گھٽتائي استعمال ڪندي بهتر ڪيو ويو. MolProbity سرور کي ماڊل ريفائنمينٽ ۽ اسٽرڪچرل تجزيي لاءِ استعمال ڪيو ويو، ۽ PyMOL ۽ UCSF Chimera X استعمال ڪندي تصويرون پيش ڪيون ويون. 67,68,69 ايپرچر تجزيو HOLE سرور استعمال ڪندي ڪيو ويو، 70 ۽ تسلسل جي تحفظ جي نقشي سازي ڪنسورف سرور استعمال ڪندي ڪئي وئي. 71
شمارياتي تجزيو ايگور پرو 6.2، ايڪسل آفيس 365، ۽ گراف پيڊ پرزم 7.0 استعمال ڪندي ڪيو ويو. سڀ مقداري ڊيٽا اوسط ± معياري غلطي (SEM) جي طور تي پيش ڪيا ويا آهن. شاگردن جو ٽي-ٽيسٽ (ٻه-ٽيل، غير جوڙيل) ٻن گروپن جي مقابلي لاءِ استعمال ڪيو ويو. ويرينس جو هڪ طرفو تجزيو (ANOVA) جنهن کان پوءِ ڊنيٽ جو پوسٽ هاڪ ٽيسٽ ڪيترن ئي گروپن جي مقابلي لاءِ استعمال ڪيو ويو. *P< 0.05، **پي< 0.01، ۽ ***P< 0.001 کي ڊيٽا جي ورڇ جي لحاظ کان شمارياتي طور تي اهم سمجهيو ويو. Kd، Ki قدر، ۽ انهن جا غير متناسب 95٪ اعتماد جا وقفا گراف پيڊ پرزم 10 استعمال ڪندي ڳڻيا ويا.
مطالعي جي طريقيڪار بابت وڌيڪ تفصيلن لاءِ، مهرباني ڪري هن مضمون ۾ ڳنڍيل نيچر پورٽ فوليو رپورٽ جو خلاصو ڏسو.
شروعاتي ماڊل PDB 4JPZ ۽ 1CFD ڊيٽابيس مان ڪيلموڊولين ماڊل استعمال ڪندي ٺاهيو ويو هو. ڪوآرڊينيٽس پروٽين ڊيٽا بينڪ (PDB) ۾ ايڪسيشن نمبر 9NVN (ليگينڊ کان سواءِ Nan-Iav-CaM)، 9NVO (نان-Iav-CaM نيڪوٽينامائيڊ سان ڳنڍيل)، 9NVP (نان-Iav-CaM نيڪوٽينامائيڊ ۽ EDTA سان ڳنڍيل)، 9NVQ (نان-Iav-CaM aphenidolpyrrolline ۽ calcium سان ڳنڍيل)، 9NVR (نان-Iav-CaM aphenidolpyrrolline ۽ EDTA سان ڳنڍيل)، ۽ 9NVS (نان پينٽامر aphenidolpyrrolline سان ڳنڍيل) جي تحت جمع ڪيا ويا آهن. لاڳاپيل ڪرائو-اليڪٽران مائڪروسڪوپي تصويرون اليڪٽران مائڪروسڪوپي ڊيٽابيس (EMDB) ۾ هيٺ ڏنل ايڪسيشن نمبرن تحت جمع ڪيون ويون آهن: EMD-49844 (ليگينڊ کان سواءِ Nan-Iav-CaM)، EMD-49845 (نيڪٽينامائيڊ سان Nan-Iav-CaM ڪمپليڪس)، EMD-49846 (نيڪٽينامائيڊ ۽ EDTA سان Nan-Iav-CaM ڪمپليڪس)، EMD-49847 (نيڪٽينامائيڊ ۽ ڪلسيم سان Nan-Iav-CaM ڪمپليڪس)، EMD-49848 (نيڪٽينامائيڊ ۽ EDTA سان Nan-Iav-CaM ڪمپليڪس)، ۽ EMD-49849 (نيٽامر ڪمپليڪس افيڊوپيرولين ۽ EDTA سان). فنڪشنل تجزيي لاءِ خام ڊيٽا هن پيپر ۾ پيش ڪيا ويا آهن.
پوسٽ جو وقت: جنوري-28-2026