ٻوٽا ۽ پيٿوجين مواد
الينوئيس يونيورسٽي (هاڻي يو سي ڊيوس ۾) ۾ ڊاڪٽر پيٽ براون پاران سورغم ڪنورشن پاپوليشن (ايس سي پي) جي نالي سان مشهور سورغم ايسوسيئيشن ميپنگ آبادي مهيا ڪئي وئي. اهو اڳ ۾ بيان ڪيو ويو آهي ۽ آمريڪي ماحول ۾ ٻوٽن جي واڌ ۽ ترقي کي آسان بڻائڻ لاءِ فوٽو پيريڊ-غير حساسيت ۽ ننڍي قد ۾ تبديل ٿيل متنوع لائينن جو هڪ مجموعو آهي. هن آبادي مان 510 لائينون هن مطالعي ۾ استعمال ڪيون ويون هيون جيتوڻيڪ خراب جراثيم ۽ ٻين معيار جي ڪنٽرول مسئلن جي ڪري، سڀني لائينن کي ٽنهي خاصيتن جي تجزيي ۾ استعمال نه ڪيو ويو. آخرڪار 345 لائينن مان ڊيٽا چٽين جي جواب جي تجزيي لاءِ، 472 لائينون flg22 جواب لاءِ، ۽ 456 TLS مزاحمت لاءِ استعمال ڪيون ويون.بي. ڪوڪيLSLP18 جو اسٽرين آرڪنساس يونيورسٽي ۾ ڊاڪٽر برٽ بلهم کان حاصل ڪيو ويو.
MAMP جواب جي ماپ
هن مطالعي ۾ ٻه مختلف MAMP استعمال ڪيا ويا flg22، (Genscript catalog# RP19986)، ۽ chitin. گرين هائوس ۾ مٽيءَ سان ڀريل فليٽ (33٪ سنشائن ريڊي-ارٿ پرو گروئنگ مڪس) تي رکيل انسرٽس ۾ سورگم ٻوٽا پوکيا ويا. نموني گڏ ڪرڻ کان هڪ ڏينهن اڳ ٻوٽن کي پاڻي ڏنو ويو ته جيئن گڏ ڪرڻ واري ڏينهن تي اضافي پنن جي نمي کان بچي سگهجي.
لائينن کي بي ترتيب بڻايو ويو ۽، لاجسٽڪ سببن جي ڪري، 60 لائينن جي بيچن ۾ پوکيو ويو. هر لائن لاءِ، ٽي 'پٽ' هر لائن ۾ ٻه ٻج سان پوکيا ويا. پوئين بيچ کي پروسيس ڪرڻ کان پوءِ ايندڙ بيچ پوکيا ويا جيستائين پوري آبادي جو جائزو نه ورتو ويو. ٻنهي MAMPs لاءِ ٻه تجرباتي رن ڪيا ويا جن ۾ جينوٽائپس کي ٻن رنن مان هر هڪ ۾ ٻيهر بي ترتيب ڪيو ويو.
ROS جاچ اڳ ۾ بيان ڪيل طريقي سان ڪئي وئي. مختصر طور تي، هر لڪير لاءِ، ڇهه ٻج 3 مختلف ٿانون ۾ پوکيا ويا. نتيجي ۾ نڪرندڙ ٻج مان، ٽي هڪجهڙائي جي بنياد تي چونڊيا ويا. اهي ٻج جيڪي غير معمولي نظر اچن ٿا يا اڪثريت کان گهڻو ڊگها يا ننڍا هئا، استعمال نه ڪيا ويا. ٽن مختلف 15 ڏينهن جي سورگم ٻوٽن جي چوٿين پن جي ويڪري حصي مان 3 ملي ميٽر قطر جا چار پن ڊسڪ ڪڍيا ويا. ٻن ٻوٽن مان هر پن جي هڪ ڊسڪ ۽ هڪ ٻوٽي مان ٻه ڊسڪ، ٻئي ڊسڪ سان پاڻي جو ڪنٽرول بڻجي ويو (هيٺ ڏسو). ڊسڪ کي انفرادي طور تي 50 μl H20 تي هڪ ڪاري 96 ويل پليٽ ۾ ترايو ويو، روشني جي نمائش کان بچڻ لاءِ ايلومينيم سيل سان بند ڪيو ويو، ۽ رات جو ڪمري جي حرارت تي رکيو ويو. ٻئي ڏينهن صبح جو 2 mg/ml ڪيميلومينسينٽ پروب L-012 (واڪو، ڪيٽلاگ # 120-04891)، 2 mg/ml هارسريڊش پيرو آڪسيڊيس (ٽائيپ VI-A، سگما-الڊرچ، ڪيٽلاگ # P6782)، ۽ 100 mg/ml چٽين يا Flg22 جي 2 μM استعمال ڪندي هڪ رد عمل جو محلول ٺاهيو ويو. هن رد عمل جي محلول جو 50 μl چئن مان ٽن کوهن ۾ شامل ڪيو ويو. چوٿون کوهه هڪ ماڪ ڪنٽرول هو، جنهن ۾ MAMP کان سواءِ رد عمل جو محلول شامل ڪيو ويو. هر پليٽ ۾ صرف پاڻي تي مشتمل چار خالي کوهه پڻ شامل ڪيا ويا.
رد عمل جي حل کي شامل ڪرڻ کان پوءِ، روشني کي SynergyTM 2 ملٽي ڊيٽيڪشن مائڪروپليٽ ريڊر (بايوٽيڪ) استعمال ڪندي هر 2 منٽ 1 ڪلاڪ لاءِ ماپيو ويو. پليٽ ريڊر هن 1 ڪلاڪ دوران هر 2 منٽ ۾ روشني جي ماپ وٺندو آهي. هر کوهه جي قيمت ڏيڻ لاءِ سڀني 31 ريڊنگز جو مجموعو ڳڻيو ويو. هر جينوٽائپ لاءِ MAMP جواب لاءِ اندازي مطابق قيمت (ٽن تجرباتي کوهن جي سراسري روشني جي قيمت - موڪ ويل ويليو) جي حساب سان ڳڻيو ويو - سراسري خالي ويل ويليو کان گھٽ. خالي ويل ويليو مسلسل صفر جي ويجهو هيون.
ليف ڊسڪس آفنڪوٽيانا بينٽهاميانا، هڪ هاءِ ريسپانسو سورغم لائن (SC0003)، ۽ هڪ گهٽ ريسپانسو سورغم لائن (PI 6069) پڻ معيار جي ڪنٽرول جي مقصدن لاءِ هر 96-ويل پليٽ ۾ ڪنٽرول طور شامل ڪيا ويا.
بي. ڪوڪيٽيڪو تيار ڪرڻ ۽ ٽيڪو لڳائڻ
بي. ڪوڪيانوڪولم تيار ڪيو ويو جيئن اڳ بيان ڪيو ويو هو. مختصر طور تي، جوار جي اناج کي ٽن ڏينهن تائين پاڻيءَ ۾ ٻوڙيو ويو، ڌوئي، 1 ليٽر مخروطي فلاسڪس ۾ اسڪوپ ڪيو ويو ۽ 15psi ۽ 121 °C تي هڪ ڪلاڪ لاءِ آٽو ڪليو ڪيو ويو. پوءِ اناج کي تازي ڪلچر مان لڳ ڀڳ 5 ملي ليٽر ميڪريٽڊ مائيسيليا سان ٽيڪو ڪيو ويو.بي. ڪوڪيLSLP18 کي الڳ ڪري ڪمري جي حرارت تي 2 هفتن لاءِ ڇڏيو ويندو آهي، هر 3 ڏينهن ۾ فلاسڪس کي هلايو ويندو آهي. 2 هفتن کان پوءِ، فنگس متاثر ٿيل سورگم اناج کي هوا ۾ خشڪ ڪيو ويندو هو ۽ پوءِ 4 °C تي فيلڊ انوڪيوليشن تائين ذخيرو ڪيو ويندو هو. ساڳئي انوڪيولم کي پوري آزمائش لاءِ استعمال ڪيو ويندو هو ۽ هر سال تازو ڪيو ويندو هو. انوڪيوليشن لاءِ، 6-10 متاثر ٿيل اناج کي 4-5 هفتن جي سورگم ٻوٽن جي وور ۾ رکيو ويندو هو. انهن فنگس مان پيدا ٿيندڙ اسپور هڪ هفتي اندر نوجوان سورگم ٻوٽن ۾ انفيڪشن شروع ڪندا هئا.
ٻج جي تياري
پوکڻ کان اڳ جوار جي ٻج کي ڦڦڙ مار دوا، جيت مار دوا، ۽ سيفنر جي مرکب سان علاج ڪيو ويو جنهن ۾ ~ 1٪ اسپيراٽو 480 FS فنگسائيڊ، 4٪ سيبرنگ 480 FS فنگسائيڊ، 3٪ سورپرو 940 ES سيڊ سيفنر شامل هئا. پوءِ ٻج کي 3 ڏينهن تائين هوا ۾ سڪايو ويو جنهن ٻج جي چوڌاري هن مرکب جي هڪ پتلي پرت فراهم ڪئي. سيفنر جڙي ٻوٽي مار دوا ڊول ميگنم کي اڀرڻ کان اڳ علاج جي طور تي استعمال ڪرڻ جي اجازت ڏني.
ٽارگيٽ ليف اسپاٽ مزاحمت جو جائزو
ايس سي پي ڪليٽن، اين سي ۾ سينٽرل ڪراپس ريسرچ اسٽيشن تي 14-15 جون 2017 ۽ 20 جون 2018 تي هڪ بي ترتيب مڪمل بلاڪ ڊيزائن ۾ هر ڪيس ۾ ٻه تجرباتي نقل سان لڳايو ويو. تجربا 1.8 ميٽر سنگل قطارن ۾ 0.9 ميٽر قطار جي ويڪر سان هر پلاٽ تي 10 ٻج استعمال ڪندي پوکيا ويا. ڪنڊ جي اثرات کي روڪڻ لاءِ هر تجربي جي چوڌاري ٻه بارڊر قطارون لڳايون ويون. تجربن کي 20 جولاءِ 2017 ۽ 20 جولاءِ 2018 تي انوڪيليٽ ڪيو ويو جنهن وقت سورگم ٻوٽا واڌ جي مرحلي 3 تي هئا. درجه بندي هڪ کان نو اسڪيل تي ورتي وئي، جتي بيماري جي ڪا به نشاني نه ڏيکاريندڙ ٻوٽن کي نو جي طور تي اسڪور ڪيو ويو ۽ مڪمل طور تي مئل ٻوٽن کي هڪ جي طور تي اسڪور ڪيو ويو. 2017 ۾ ٻه درجه بندي ورتي وئي ۽ 2018 ۾ چار ريڊنگ هر سال انوڪيليٽيشن کان ٻن هفتن کان شروع ٿيندي. sAUDPC (بيماري جي ترقي جي وکر تحت معياري علائقو) جو حساب اڳ بيان ڪيل طور تي ڪيو ويو.
پوسٽ جو وقت: اپريل-01-2021