جينوم-وائڊ ايسوسيئيشن جو تجزيو MAMP جي طاقت جو تجزيو ڪيو دفاعي جواب ۽ مزاحمت جوارم ۾ پتي جي جڳھ کي نشانو بڻائڻ لاءِ

ٻوٽي ۽ pathogen مواد

هڪ سورغم ايسوسيئيشن ميپنگ پاپوليشن جنهن کي سورغم ڪنورشن پاپوليشن (ايس سي پي) جي نالي سان سڃاتو وڃي ٿو، ڊاڪٽر پيٽ برائون پاران الينوس يونيورسٽي (هاڻي يو سي ڊيوس ۾) مهيا ڪيو ويو.اهو اڳ بيان ڪيو ويو آهي ۽ متنوع لائينن جو هڪ مجموعو آهي جيڪو فوٽوپيريڊ-حساسيت ۽ ننڍي قد ۾ تبديل ڪيو ويو آهي ته جيئن آمريڪا جي ماحول ۾ ٻوٽن جي واڌ ۽ ترقي کي آسان بڻائي سگهجي.هن آبادي مان 510 لائينون هن مطالعي ۾ استعمال ڪيون ويون آهن جيتوڻيڪ خراب جراثيم ۽ ٻين معيار جي ڪنٽرول مسئلن جي ڪري، سڀئي لائينون سڀني ٽن خاصيتن جي تجزيي ۾ استعمال نه ڪيا ويا.آخرڪار 345 لائينن مان ڊيٽا استعمال ڪيا ويا chitin جواب جي تجزيو لاءِ، 472 لائينون flg22 جواب لاءِ، ۽ 456 TLS مزاحمت لاءِ.بي ڪوڪيstrain LSLP18 آرڪنساس يونيورسٽي ۾ ڊاڪٽر برٽ بلهم کان حاصل ڪئي وئي.

MAMP جواب جي ماپ

هن مطالعي ۾ ٻه مختلف MAMPs استعمال ڪيا ويا flg22، (Genscript catalog # RP19986)، ۽ chitin.سورغم ٻوٽا گرين هائوس ۾ مٽي سان ڀريل فليٽ تي رکيل داخلن ۾ پوکيا ويا (33٪ سن شائن ريڊي-ارٿ پرو گروئنگ ميڪس).نموني گڏ ڪرڻ کان هڪ ڏينهن اڳ ٻوٽن کي پاڻي ڏنو ويندو هو ته جيئن گڏ ٿيڻ واري ڏينهن اضافي پتي جي نمي کان بچڻ لاء.

لائينون بي ترتيب ڪيون ويون ۽، منطقي سببن جي ڪري، 60 لائينن جي بيچ ۾ پوکيا ويا.هر لڪير لاءِ، ٽي ’پٽ‘ پوکيا ويا هئا جن ۾ ٻه ٻج في لڪير هئا.پوئين بيچ کي پوکيو ويو جيئن اڳئين بيچ تي عمل ڪيو ويو جيستائين سڄي آبادي جو اندازو لڳايو ويو.ٻن تجرباتي رن ٻنهي MAMPs لاءِ ڪيا ويا جينوٽائپس سان گڏ هر ٻن رنن ۾ بي ترتيب ٿيل.

ROS assays ڪيا ويا جيئن اڳ بيان ڪيو ويو آهي.مختصر طور، هر لڪير لاء، ڇهه ٻج 3 مختلف برتن ۾ پوکيا ويا.نتيجو نڪرندڙ ٻج مان، ٽي چونڊيا ويا يونيفارم جي بنياد تي.ٻج جيڪي غير معمولي نظر اچن ٿا يا خاص طور تي ڊگھا يا اڪثريت کان ننڍا هئا استعمال نه ڪيا ويا.3 ملي ميٽر قطر جا چار ليف ڊسڪ ٽن مختلف 15 ڏينهن پراڻن سورغم ٻوٽن جي چوٿين پتي جي وسيع حصي مان ڪڍيا ويا.ٻن ٻوٽن مان هڪ ڊسڪ في پتي ۽ هڪ ٻوٽي مان ٻه ڊسڪ، ٻئي ڊسڪ پاڻي جي ڪنٽرول بنجي ٿي (هيٺ ڏسو).ڊسڪ انفرادي طور تي 50 µl H20 تي هڪ ڪارو 96-Woll پليٽ ۾، هڪ ايلومينيم جي مهر سان سيل ڪيو ويو ته جيئن روشني جي نمائش کان بچڻ لاء، ۽ رات جو ڪمري جي حرارت تي رکيو وڃي.ٻئي صبح جو رد عمل حل ڪيو ويو 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, catalog # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Type VI-A, Sigma-Aldrich, catalog # P6782), ۽ 100 mg/ml Chitin يا 2 μM جو Flg22.50 µl هن رد عمل جو حل شامل ڪيو ويو ٽن چئن کوهن ۾.چوٿين کوهه هڪ ٺٺولي ڪنٽرول هو، جنهن ۾ MAMP کانسواءِ رد عمل جو حل شامل ڪيو ويو هو.هر پليٽ ۾ صرف پاڻي جا چار خالي کوهه به شامل هئا.

رد عمل جو حل شامل ڪرڻ کان پوءِ، luminescence ماپ ڪئي وئي SynergyTM 2 ملٽي ڊيٽيڪشن مائڪروپليٽ ريڊر (BioTek) هر 2 منٽ لاءِ 1 ڪلاڪ.پليٽ ريڊر هن 1 ڪلاڪ دوران هر 2 منٽ ۾ luminescence جي ماپ وٺندو آهي.سڀني 31 پڙهڻين جو مجموعو حساب ڪيو ويو ته هر کوهه جي قيمت ڏيڻ لاء.هر جينوٽائپ لاءِ MAMP جواب لاءِ تخميني قدر ڳڻيو ويو جيئن (ٽي تجرباتي کوهن جو سراسري luminescence قدر- ماڪ ويل ويل ويل) - منٽ سراسري خالي چڱي قدر.خالي کوهه جا قدر مسلسل صفر جي ويجهو هئا.

ليف ڊسڪ جينڪوٽيانا benthamiana، هڪ اعلي جوابي سورغم لائن (SC0003)، ۽ هڪ گهٽ جوابي سورغم لائن (PI 6069) پڻ شامل ڪيا ويا ڪنٽرول جي طور تي هر 96-ويل پليٽ ۾ معيار ڪنٽرول مقصدن لاءِ.

بي ڪوڪيinoculum تيار ڪرڻ ۽ inoculation

بي ڪوڪيinoculum تيار ڪيو ويو جيئن اڳ بيان ڪيو ويو آهي.مختصر طور تي، جوار جي اناج کي ٽن ڏينهن لاءِ پاڻيءَ ۾ لڪايو ويو، ڌوئي، 1L مخروطي فلاسڪس ۾ اسڪوپ ڪيو ويو ۽ 15psi ۽ 121 °C تي هڪ ڪلاڪ لاءِ پاڻهي بند ڪيو ويو.ان کان پوءِ اناج کي اٽڪل 5 ملي ميٽر ميڪريل مائيسيليا جي تازي ڪلچر مان لڳايو ويو.بي ڪوڪيLSLP18 الڳ ڪري ٿو ۽ ڪمري جي حرارت تي 2 هفتن لاءِ ڇڏي ٿو، هر 3 ڏينهن ۾ فلاسڪس کي ڇڪيو.2 هفتن کان پوءِ، ڦڦڙن سان متاثر ٿيل سورغم جي داڻي کي هوا سان خشڪ ڪيو ويو ۽ پوءِ 4 ڊگري سينٽي گريڊ تي ذخيرو ڪيو ويو جيستائين فيلڊ جي انووليشن تائين.ساڳئي انوکولم سڄي آزمائش لاء استعمال ڪيو ويو ۽ هر سال تازو ڪيو ويو.انوڪيوليشن لاءِ، 6 کان 10 متاثر ٿيل اناج 4-5 هفتا پراڻا جوار جي ٻوٽن جي ٻوٽي ۾ رکيا ويا.انهن ڦڦڙن مان پيدا ٿيندڙ spores هڪ هفتي اندر نوجوان سورغم ٻوٽن ۾ انفيڪشن شروع ڪري ڇڏيا آهن.

ٻج جي تياري

زمين ۾ پوکڻ کان اڳ جوار جي ٻج کي فنگسائيڊ، انسٽيڪسائيڊ ۽ سيفنر مرکب سان علاج ڪيو ويو جنهن ۾ ~ 1٪ Spirato 480 FS فنگسائيڊ، 4٪ Sebring 480 FS فنگسائيڊ، 3٪ Sorpro 940 ES سيڊ سيفنر شامل آهن.پوءِ ان ٻج کي 3 ڏينهن تائين هوا ۾ سڪيو ويو، جنهن ڪري ٻج جي چوڌاري هن مزي جي پتلي ڪوٽنگ ڏني وئي.حفاظتي دوا جي استعمال جي اجازت ڏني وئي دوئي ميگنم جي جراثيم جي استعمال کان اڳ جي علاج جي طور تي.

ٽارگيٽ ليف اسپاٽ مزاحمت جو جائزو

SCP 14-15 جون 2017 ۽ جون 20، 2018 تي ڪليٽن، NC ۾ سينٽرل ڪرپس ريسرچ اسٽيشن تي پوکيو ويو بي ترتيب ٿيل مڪمل بلاڪ ڊيزائن ۾ هر ڪيس ۾ ٻن تجرباتي نقلن سان.تجربا 1.8 ميٽر واحد قطار ۾ پوکيا ويا 0.9 ميٽر قطار جي ويڪر ۾ 10 ٻج في پلاٽ استعمال ڪندي.ٻه سرحدون قطارون هر تجربي جي پردي جي چوڌاري پوکيون ويون ته ڪنارن جي اثرن کي روڪڻ لاءِ.تجربا 20 جولاءِ 2017 ۽ 20 جولاءِ 2018 تي لڳايا ويا، جنهن وقت سورغم جا ٻوٽا ترقي جي اسٽيج 3 تي هئا. ريٽنگون هڪ کان 9 اسڪيل تي ورتيون ويون، جتي ٻوٽا جن ۾ بيماريءَ جون نشانيون نه هيون، انهن کي نو ۽ مڪمل طور تي نشان لڳايو ويو. مئل ٻوٽن کي هڪ ڪيو ويو.2017 ۾ ٻه درجه بنديون ورتيون ويون ۽ 2018 ۾ چار ريڊنگون هر سال انووليشن کانپوءِ ٻن هفتن کان شروع ٿينديون.sAUDPC (بيماري جي ترقي جي وکر تحت معياري علائقو) حساب ڪيو ويو جيئن اڳ بيان ڪيو ويو آهي.